期刊简介
本刊由中华预防医学会，广东省寄生虫学会主办，中山大学中山医院寄生虫学研究所，第一军医大学热带医学研究所，广东省寄生虫病防治研究所承办，编委会由全国及香港知名的寄生虫学，病原生物学，分子生物学等十余位专家组成，发行全国内各高校，研究机构及卫生医疗部门及港澳、台湾、英美地区。本刊专业论文起点高，质量优，印刷精美。
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- 杂志名称：热带医学杂志
- 主管单位：广东省科学技术协会
- 主办单位：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
- 国际刊号：1672-3619
- 国内刊号：44-1503/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：Caj-cd规范获奖期刊期刊收录：国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美)
HCV亚基因复制子支持细胞的筛选
邬刚；吴英松；董文其；陈白虹；李明
关键词：HCV, 亚基因复制子, 哺乳动物细胞
摘要：目的寻找新的支持HCV亚基因复制子复制的支持细胞,为研究HCV复制机制、HCV与宿主间的关系,及建立HCV缺陷病毒培养体系提供材料储备.方法质粒pNNeo3-5B含HCV-N亚基因复制子cDNA,该复制子RNA能在Huh7细胞中有效复制.缺失其中的BsaB Ⅰ-Hpa Ⅰ片段(含NS5B的GDD基序),生成缺陷型复制子质粒pNNeo3-5B(△).将以上两个质粒线性化后体外转录出复制子RNA:rNNeo3-5B和rNNeo3-5B(△).将rNNeo3-5B电转染Huh7、SMMC7721、HepG2、BEL7402、Lo2、CBRH7919、BHIK21、Vero E6、293和293T等细胞,以G418筛选3周,观察克隆形成情况,并检测克隆中HCV特异性RNA和蛋白.结果在CBRH7919和BHK21获得G418抗性克隆,转染rNNeo3-5B(△)的细胞和未转染复制子的细胞则全部死亡.RT-PCR检测证实各克隆都含有HCV 5'NTR和新霉素磷酸转移酶基因,间接免疫荧光和Western blot检测证实有大量表达的HCV NS3和NS5A蛋白,未转染复制子的细胞全为阴性.结论本研究证实CBRH7919和BHK21能支持HCV复制子的自主复制,可作为建立HCV病毒培养体系的备选材料.
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