期刊简介
本刊由中华预防医学会，广东省寄生虫学会主办，中山大学中山医院寄生虫学研究所，第一军医大学热带医学研究所，广东省寄生虫病防治研究所承办，编委会由全国及香港知名的寄生虫学，病原生物学，分子生物学等十余位专家组成，发行全国内各高校，研究机构及卫生医疗部门及港澳、台湾、英美地区。本刊专业论文起点高，质量优，印刷精美。
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首页>热带医学杂志
- 杂志名称：热带医学杂志
- 主管单位：广东省科学技术协会
- 主办单位：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
- 国际刊号：1672-3619
- 国内刊号：44-1503/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：Caj-cd规范获奖期刊期刊收录：国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美)
GFP/HBV X融合蛋白重组载体的构建及稳定表达细胞系的建立
杨林；范红梅；陈幼明；谢奇峰；吴盟；陈雪娟；李刚；高志良
关键词：乙型肝炎病毒X蛋白, 绿色荧光蛋白, 重组体, 细胞系
摘要：目的 构建绿色荧光蛋白(GFP)与人乙型肝炎病毒(HBV)X基因的重组表达载体,建立稳定表达HBV X蛋白(HBx)与GFP融合蛋白的HepG2细胞系,以进一步研究HBx的生物学功能及其在肝癌发生中的作用.方法 应用PCR法从adr亚型HBV质粒Phbv DNA中扩增HBV X基因片段,PCR产物经HindⅢ和KpnⅠ双酶切后定向插入绿色荧光蛋白真核表达载体Pegfp-C1的相应酶切位点,转化宿主菌DH5α,采用上述双酶切及DNA测序鉴定重组质粒Pgfp-HBx;采用脂质体转染法将Pegfp-C1质粒、Pgfp-HBx重组质粒DNA转染人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞,G418选择抗性细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP表达,挑取表达GFP的抗性克隆扩大培养、传代.采用RT-PCR检测转染细胞HBV X基因的表达.结果 经酶切及测序鉴定成功构建了GFP-HBV X重组表达载体Pgfp-HBx;将Pegfp-C1、Pgfp-HBx重组质粒转染HepG2,经G418筛选15d获得抗性细胞克隆.将带绿色荧光的抗性克隆细胞扩大培养并经传代70次,细胞仍表达强的荧光蛋白.RT-PCR检测表明转染Pgfp-HBx重组体的HepG2/GFP-HBx细胞有HBV X转录、表达.结论 成功构建了GFP-HBV X真核重组表达载体Pgfp-HBx;获得了稳定表达GFP-HBx融合蛋白的HepG2细胞系.这为进一步研究HBx的生物学功能以及HBx在肝癌发生中的作用与机制打下了基础.
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