期刊简介
本刊由中华预防医学会，广东省寄生虫学会主办，中山大学中山医院寄生虫学研究所，第一军医大学热带医学研究所，广东省寄生虫病防治研究所承办，编委会由全国及香港知名的寄生虫学，病原生物学，分子生物学等十余位专家组成，发行全国内各高校，研究机构及卫生医疗部门及港澳、台湾、英美地区。本刊专业论文起点高，质量优，印刷精美。
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- 杂志名称：热带医学杂志
- 主管单位：广东省科学技术协会
- 主办单位：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
- 国际刊号：1672-3619
- 国内刊号：44-1503/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：Caj-cd规范获奖期刊期刊收录：国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美)
过表达miR-19慢病毒载体的构建和鉴定
鄢文；靳文；孙晓敏；肖东
关键词：miR-19, RFP, 慢病毒载体
摘要：目的 构建过表达miR-19a/19b(miR-19)基因的慢病毒载体pm19H2BmRFP.方法 依据miR-19(784 bp)的序列设计引物,以pMIG-miR-19a/19b为模板扩增目的片段miR-19,再经胶回收、酶切并纯化而获连接用目的片段.连接用pHIV-H2BmRFP载体采用内切酶Xba Ⅰ和HpaⅠ进行双酶切,获得粘性末端线性化片段并纯化.后使用T4 DNA连接酶对纯化的线性化载体pHIV-H2BmRFP和miR-19片段进行定向连接,转化,次日挑选单菌落,提取质粒后行PCR和测序鉴定.所构建载体即为pm19H2BmRFP.参考文献方法进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;过表达miR-19和RFP的慢病毒感染293T细胞及肺腺癌细胞株A549-Luc以建立相应病毒感染体系.结果 PCR及测序结果证实成功构建了pm19H2BmRFP,过表达miR-19的慢病毒上清感染A549-Luc和293T细胞48 h后,荧光显微镜下均可观察到红色荧光.结论 成功构建过表达miR-19基因的慢病毒载体pm19H2BmRFP,为后续研究奠定基础.
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