期刊简介
本刊由中华预防医学会，广东省寄生虫学会主办，中山大学中山医院寄生虫学研究所，第一军医大学热带医学研究所，广东省寄生虫病防治研究所承办，编委会由全国及香港知名的寄生虫学，病原生物学，分子生物学等十余位专家组成，发行全国内各高校，研究机构及卫生医疗部门及港澳、台湾、英美地区。本刊专业论文起点高，质量优，印刷精美。
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首页>热带医学杂志
- 杂志名称：热带医学杂志
- 主管单位：广东省科学技术协会
- 主办单位：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
- 国际刊号：1672-3619
- 国内刊号：44-1503/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：Caj-cd规范获奖期刊期刊收录：国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美)
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ldh-1基因的序列分析及原核表达
杨丽媛；周珍文；段朝晖；周帅；关锐梨；关小珊；容莉莉
关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌, ldh-1, 克隆
摘要：目的 对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株携带的ldh-1基因进行克隆、表达,为L-乳酸脱氢酶(L-LDH)功能研究奠定基础.方法 根据金黄色葡萄球菌Newman菌株的基因序列,设计一对特异性引物,以MRSA临床分离株(菌株号:1758)DNA为模板PCR扩增ldh-1,纯化DNA进行BamH Ⅰ、Xhol Ⅰ双酶切鉴定及测序鉴定,并与做相应酶切的pET-28a(+)连接,转化大肠杆菌BL21,对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导融合蛋白的表达,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证融合蛋白的表达.诱导表达后的重组菌经超声破碎离心后,使用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白.结果 成功构建重组表达质粒pET-28a-ldh1,基因测序结果显示,扩增的ldh1基因全长956 bp,与金黄色葡萄球菌Mu50株ldh1基因的序列同源性为100％.IPTG诱导表达后,聚丙烯酰胺凝胶电泳在39x103 Mr处见目的条带,Western blot验证了重组蛋白L-LDH的表达.该蛋白呈可溶性表达,纯化后获得0.5 g/L的重组蛋白.结论 在MRSA(菌株号:1758)临床分离株中成功克隆及表达了ldh-1基因,获得了纯化的重组蛋白,为进一步进行L-LDH的功能研究奠定了基础.
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