期刊简介
本刊由中华预防医学会，广东省寄生虫学会主办，中山大学中山医院寄生虫学研究所，第一军医大学热带医学研究所，广东省寄生虫病防治研究所承办，编委会由全国及香港知名的寄生虫学，病原生物学，分子生物学等十余位专家组成，发行全国内各高校，研究机构及卫生医疗部门及港澳、台湾、英美地区。本刊专业论文起点高，质量优，印刷精美。
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首页>热带医学杂志
- 杂志名称：热带医学杂志
- 主管单位：广东省科学技术协会
- 主办单位：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
- 国际刊号：1672-3619
- 国内刊号：44-1503/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：Caj-cd规范获奖期刊期刊收录：国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美)
荧光素酶标记ROP18过表达弓形虫株的构建及验证
郝桃方；李文洁；杨子帆；杨兆收；周兴旺
关键词：弓形虫, ROP18, 荧光素酶, 毒力
摘要：目的 构建及验证荧光素酶标记ROP18过表达弓形虫ROP18?Ty1?LUC RH株,为研究弓形虫毒力及相关宿主免疫调控机制奠定良好基础.方法 利用PCR技术扩增出目的片段ROP18?Ty1和带ROP18?Ty1同源序列接头的质粒骨架,通过重组克隆系统构建既能表达ROP18?Ty1又含荧光素酶标记的质粒P?ROP18?Ty1?LUC.将质粒P?ROP18?Ty1?LUC和筛选质粒P?TUB?CAT?SAG1通过电转染的方法转染到RH株弓形虫,经过氯霉素筛选和极限稀释得到目的弓形虫ROP18?Ty1?LUC RH株.构建成功的弓形虫ROP18?Ty1?LUC RH株在基因、蛋白、动物水平进行验证.结果 利用重组克隆系统成功构建了质粒P?ROP18?Ty1?LUC,利用双酶切实验和测序验证了序列的正确性.以弓形虫ROP18?Ty1?LUC RH株基因组为模板,用特异引物能PCR扩增出1704 bp大小的ROP18?Ty1和1644 bp大小的LUC基因;用特异抗体anti?Ty1通过Western blot检测外源蛋白ROP18?Ty1的表达,在56000 Mr处有单一条带;用荧光素酶报告基因检测系统检测LUC的表达,利用多标记酶标仪检测到荧光的发射;通过活体成像系统检测ROP18?Ty1?LUC RH弓形虫株在小鼠体内的增殖,与对照组相比感染了ROP18?Ty1?LUC RH弓形虫株的小鼠体内photon值明显更多(P<0.05);后小鼠毒力实验也验证了ROP18?Ty1?LUC RH弓形虫毒力比RH?LUC弓形虫的毒力强(P<0.05).结论 成功构建和验证荧光素酶标记的ROP18过表达弓形虫ROP18?Ty1?LUC RH株,可以在动物个体水平更客观统计ROP18对弓形虫增殖速率的影响.
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